電芬頓-磁固定化菌株耦合體系治理苯酚廢水技術

　　苯酚是一種造紙、塑料、煉焦生產行業(yè)中的常見有機污染物，具有致癌、致畸的毒性。當前在基于微生物固定方法進行苯酚廢水的處理時主要采用包埋法，然而包埋法在實際運用時受質子傳遞效應的影響，其酶分子空間自由度受到限制，無法實現(xiàn)對工業(yè)廢水的高效處理，因此急需對其工藝進行改進。

　　1、材料與方法

　　1.1 苯酚降解菌制備與培養(yǎng)基

　　從某污水處理廠中提取活性污泥樣品，以苯酚作為唯一碳源和能源，選取500mg/L苯酚添加到樣品中，經過1個月后從活性污泥中馴化培養(yǎng)出混合菌群，采用平板涂布法篩選出1株JS菌株作為苯酚降解菌，實現(xiàn)對菌株的分離與純化，并分別完成無機鹽培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)基的配制。

　　1.2 磁固定化細胞的制備

　　收集JS菌液，將其以8000r/min的轉速離心5min，收集菌體、棄去上清液，利用三羥甲基氨基甲烷將其洗滌3次，用無菌去離子水配制成2g菌懸液。選取0.75g結冷膠溶于65℃以上的37.5mL無菌去離子水中，依次向溶液中加入10mL菌懸液與1.2mg的r-Fe2O3，待將溶液均勻混合后，利用注射器滴入0.2mol/L磁性物質GaCl2中，在4℃溫度條件下交聯(lián)反應120min，即可制備出磁固定化細胞。

　　1.3 耦合體系的建立與試驗

　　設計進水水質成分包含500mg/L苯酚、7.1g/L硫酸鈉、2g/L硫酸銨，曝氣量設為0.2L/min，將制備出的磁固定化細胞加入到無電極反應器中，反應器容積為1L，采用高效液相色譜儀測定苯酚濃度，并選取多個時間節(jié)點記錄苯酚降解率。選取7×4cm的石墨板與7×4cm的不銹鋼網(wǎng)分別作為陽極和陰極，將組建好的電極體系放置到反應器中，利用導線將其與直流穩(wěn)壓電源PS-303D相連，分別檢測出磁固定化細胞、電芬頓體系與耦合體系的苯酚降解率，并分析電壓、溫度、pH值等變量對苯酚降解率的影響。待完成反應器試驗后，利用磁鐵提取出耦合體系中的磁固定化細胞，將磁固定化細胞置入無菌去離子水中洗滌2次，隨后重新進水，并針對苯酚降解率進行測定，共循環(huán)6次。

　　1.4 酶活性與菌株濃度的檢測

　　在反應12h后，針對苯酚羥化酶的活性進行檢測，將磁固定化細胞置于5%檸檬酸鈉溶液中，待充分溶解后離心處理、棄去上清液，利用三羥甲基氨基甲烷將其洗滌3次后懸浮，將懸浮液放入超聲破碎儀中破碎0.5h，在4℃條件下以22000r/min的轉速離心0.5h，提取其上清液作為粗酶液，并分別采用紫外-可見分光光度計與qPCR儀完成酶活性與菌株濃度的測定。

　　2、結果與討論

　　2.1 磁固定化細胞的苯酚降解特性分析

　　為研究耦合體系的苯酚降解率，首要前提是針對磁固定化細胞的苯酚降解特性進行測定，選取游離細胞、非磁固定化細胞與磁固定化細胞作為對照組，記錄伴隨反應時間推移三種物質的苯酚降解率變化情況。通過觀察反應結果可以發(fā)現(xiàn)，在反應時間到達15h時，三種物質對苯酚的降解率分別為85.3%、77.6%和90.7%，其中非磁固定化細胞的降解率最低，主要受制于質子傳遞效應的影響，結冷膠與菌株結合后影響到苯酚在細胞內部的傳達效果;游離細胞對苯酚的降解率低于磁固定化細胞，其主要原因是高濃度污染物在接觸到游離細胞后將對細胞活性產生抑制作用，削弱其對于苯酚的降解速率;磁固定化細胞對苯酚的降解率最高，主要原因是r-Fe2O3納米顆粒對于結冷膠與菌株的結合起到了有效的疏散作用，可促使苯酚順利進入到細胞內部，有效優(yōu)化苯酚降解效果[2]。

　　2.2 電壓對苯酚降解性能的影響

　　將反應時間設為12h，電壓分別取值為0V、0.5V、1V、1.5V和2V，試分析不同電壓條件下苯酚降解率的變化。通過觀察試驗結果可以發(fā)現(xiàn)，在電壓為0-1V時，耦合體系的苯酚降解率呈不斷提升趨勢，待反應到達12h時降解率達到100%;但在電壓為1-2V時，耦合體系的苯酚降解率呈逐漸下降趨勢，待反應時長為12h時降解率降至53.7%。由此可以推斷出，在電壓超過一定數(shù)值時將削弱磁固定化細胞的降解性能，并且還將增加能耗問題，因此該耦合體系的最佳電壓數(shù)值應設為1V。

　　同時，JS菌株中的苯酚羥化酶是促進苯酚生物降解的關鍵酶，苯酚羥化酶的活性將直接影響到微生物降解效果。通過觀察電壓對苯酚羥化酶活性的影響結果可以發(fā)現(xiàn)，在電壓處于0～1V范圍內時，苯酚羥化酶的活性增加了0.101U/mg;在電壓處于1～2V范圍內時，苯酚羥化酶的活性降低了0.208U/mg。由此可以推斷出，倘若電壓值過高也會對苯酚羥化酶的活性產生抑制作用，該耦合體系在電壓為1V時苯酚羥化酶活性達到最大值。

　　2.3 pH值對苯酚降解性能的影響

　　在反應時間為12h、電壓為1V的條件下，將pH值分別取值為2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5和7，試分析不同pH值對于耦合體系的苯酚降解性能的影響。從中可以看出，當pH值為2.5時，苯酚降解率為最低值61.7%;當pH值逐漸升高至3.5時，苯酚降解率增至86.75%;此后在pH值由3.5升至7期間，苯酚降解率始終保持穩(wěn)定值，無明顯變化。由此可以推斷出，耦合體系在酸性條件下的降解性能達到最優(yōu)，但過酸條件下也將限制鐵離子參與電芬頓反應、抑制磁固定化細胞的降解效果，因此宜將耦合體系反應的最佳pH值設為3.5。

　　2.4 溫度對苯酚降解性能的影響

　　在反應時間為12h、電壓為1V、pH值為3.5的條件下，將反應溫度分別取值為16℃、20℃、24℃、28℃、32℃、36℃、40℃、44℃，試分析不同溫度對于耦合體系的苯酚降解性能的影響。從中可以看出，在反應溫度由16℃升高至24℃過程中，苯酚降解率處于逐漸攀升趨勢;在反應溫度處于24～32℃范圍內時，苯酚降解率攀升幅度較大;在反應溫度由32℃增至44℃期間，苯酚降解率呈下降趨勢，并且在溫度超過40℃后溫度急劇下降。由此可以推斷出，溫度變化將影響到耦合體系對于苯酚的降解性能，溫度過高或較低均會抑制苯酚降解效果，宜將該耦合體系反應的最適宜溫度設為32℃。

　　2.5 其他外緣因素的影響效果

　　除電壓、pH值、溫度等反應條件外，培養(yǎng)基的配方也將影響到菌株對于苯酚的降解性能。將酵母粉、蛋白胨、葡萄糖的質量分數(shù)設為0.4%，硫酸銅質量分數(shù)為0.05%，通過觀察試驗結果可以發(fā)現(xiàn)，以葡萄糖、硫酸銅作為培養(yǎng)基配方時，菌株對于苯酚的降解性能較低;以葡萄糖和重金屬銅離子作為培養(yǎng)基配方時，菌株的苯酚降解率分別為85.1%和70.8%;以酵母膏、蛋白胨作為培養(yǎng)基配方時，菌株的苯酚降解率分別為93.3%和99.2%。由此可以推斷出，以培養(yǎng)基配方為代表的外緣因素也將影響到耦合體系的苯酚降解性能。

　　3、結論

　　本文從活性污泥中篩選出1株JS菌株制備磁固定化細胞，將其與電芬頓體系結合構成耦合體系。試驗結果表明，在電壓為1V、溫度為32℃、pH值為7～7.5的反應條件下，該耦合體系對苯酚的降解率達到最優(yōu)值，并且隨重復利用率的增加，其降解性能呈現(xiàn)出顯著提升，可實現(xiàn)對苯酚廢水降解效果的有效優(yōu)化。(來源：鑫億森環(huán)?？萍?徐州)有限公司)